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摘要：目的 就纳米银对牙本质表面粪肠球菌生物膜的杀菌作用进行探讨。方法 收集80颗无龋坏、完整无缺的前磨牙，将其制成309个牙本质片，随机分为A组（纳米银组）、B组（次氯酸钠组）、C组（氯化钠组），每组有103个样本。活菌菌落计数法检测粪肠球菌生物膜活菌数，粪肠球菌生物膜的内层活菌、中间层活菌、外层活菌百分比用激光共聚焦显微镜来进行观察。结果随着0.1%纳米银溶液的处理时间的延长，粪场球菌生物膜活菌的数量呈现出较为明显的降低趋势，到24h之后就没有活菌出现在生物膜内。与此同时，生物膜内层、中间层、外层活菌的平均厚度、百分比逐渐减少。结论 对于粪肠球菌生物膜而言，含量为0.1%的纳米银溶液有着较强的杀菌作用和渗透能力，能够随着处理时间的延长而让杀菌作用增强，最佳的作用时间为处理24h以上。 
　　关键词：纳米银；牙本质表面；粪肠球菌生物膜；杀菌作用 
　　从目前来看，再感染根管中最常检测到的细菌为粪肠球菌，它也是主要的致病菌。在这种情况下，寻找出一种有效、安全的抗菌剂，是提高根管治疗成功率的重要途径之一。而纳米银的生物安全性良好、抗菌性能较强，特别适用于作为新型抗菌剂[1]。本文就纳米银对牙本质表面粪肠球菌生物膜的杀菌作用进行探讨。 
　　1 资料与方法 
　　1.1一般资料 
　　1.1.1实验菌株 选择由广东省微生物研究所提供的粪肠球菌。 
　　1.1.2主要实验试剂 心脑浸出液培养基、含量为5.25%次氯酸钠溶液、含量为0.1%纳米银溶液、含量为0.9%氯化钠溶液。 
　　1.1.3主要实验仪器：FV500-IX81激光共聚焦显微镜、B3510E-DTH超声清洗器、11-1280-250型切片机、JSM-6330E场发射扫描电镜、LI20-2恒温培养箱、厌氧罐。 
　　1.2方法 
　　1.2.1牙本质片的制备及分组 收集80颗无龋坏、完整无缺的前磨牙，将其制成309个牙本质片，随机分为A组（纳米银组）、B组（次氯酸钠组）、C组（氯化钠组），每组有103个样本。样本经超声清洗、灭菌之后保存在无菌PBS缓冲液内，保存温度控制在4℃。 
　　1.2.2构建牙本质表面粪肠球菌生物膜：复苏粪肠球菌后，将其放置在BHI液体培养基中进行培养，培养温度控制在37℃，培养时间控制在16h。菌悬液用BHI液体培养基来调整到1×107CFU/ml，按每孔2ml加到24孔板内，每孔1个样本。 
　　1.2.3粪肠球菌生物膜的表面形态进行扫描电镜观察：将A、B、C组样本都进行24h培养，然后从其0h小组中随机取3个样本，将这些样板上没有黏附的细菌用双蒸水清洗2次以上，再进行固定制样，以此观察粪肠球菌生物膜的表面形态。 
　　1.2.4活菌菌落计数法检测粪肠球菌生物膜活菌数 分别采用含量为5.25%次氯酸钠溶液、含量为0.1%纳米银溶液、含量为0.9%氯化钠溶液对样本进行处理，在处理之前的1、6、12、24h时分别从三组中各取10个样本，双蒸水清洗2次，然后再将其放入无菌PBS的试管中，培养48h后菌落计数。 
　　1.2.5粪肠球菌生物膜的内层活菌、中间层活菌、外层活菌百分比用激光共聚焦显微镜来进行观察。 
　　2 结果 
　　随着0.1%纳米银溶液的处理时间的延长，粪场球菌生物膜活菌的数量呈现出较为明显的降低趋势，到24h之后就没有活菌出现在生物膜内。与此同时，生物膜内层、中间层、外层活菌的平均厚度、百分比逐渐减少。生物膜结构被含量为0.1%纳米银溶液处理1h之后，并没有完全解体，但生物膜内层活菌百分比降至（20.8%±4.5%），中间层活菌百分比降至（27.4%±5.6%）；在处理6h之后，生物膜内层活菌百分比降至（1.8%±0.9%），中间层活菌百分比降至（2.0%±0.9%）。0.1%纳米银溶液处理12h、24h，生物膜各层活菌百分比与1.313%次氯酸钠溶液组差异无统计学意义（P>0.05），但是都要明显低于0.9%氯化钠溶液组，存在着统计学意义。作者： 赵亮 闫磊 阴平 付爽 袁雪明 周立波

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